細胞培養完整手冊

常用設備

準備室的設備：

單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品規（放置消毒過的物品）、包裝臺。配液室的設備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、 PH 計（測量培養用液 PH 值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。

培養室的設備：

液氮罐、儲品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統、低溫冰箱（ -80℃ ）、空調、二氧化碳缸瓶、邊臺（書寫實驗記錄）。

必須放在無菌間的設備：

離心機（收集細胞）、超凈工作臺、倒置顯微鏡、 CO2 孵箱（孵育培養物）、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、 4℃ 冰箱（放置 serum 和培養用液）。

無菌操作基本技術

無菌室的滅菌：

1.定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等，然后用 3‰ 來蘇爾或者新潔爾滅或者 0.5 ％過氧乙酸擦拭。

2.CO2 孵箱（培養箱）滅菌：先用 3‰ 新潔爾滅擦拭，然后用 75 ％酒精擦拭或者 0.5 ％過氧乙酸，再用紫外燈照射。

3.實驗前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統各 20-30 分鐘 。

4.實驗后滅菌：用 75 ％酒精（ 3‰ 新潔爾滅）擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。

5.定期檢測下列項目：鋼瓶之CO 壓力；CO2培養箱之CO２濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水，每周更換)；無菌操作臺內之airflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜，預濾網(300 小時/預濾網，3000 小時/HEPA)。

6.水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750)，定期更換水槽的水。

實驗人員的無菌準備：

1.肥皂洗手。

2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋

3.用75 ％酒精棉球擦凈雙手。

無菌操作的演示：

1.凡是帶入超凈工作臺內的酒精、 PBS 、培養基、胰蛋白酶的瓶子均要用 75 ％酒精擦拭瓶子的外表面

2.靠近酒精燈火焰操作。

3.器皿使用前必須過火滅菌

4.繼續使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時仍要過火。

5.各種操作要靠近酒精燈，動作要輕、準確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。

6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管，防止交叉污染。

器械的清洗和消毒

玻璃器械洗消：

一、新的玻璃器皿的洗消：

1.自來水刷洗，除去灰塵。

2.烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入 5 ％稀鹽酸中 12 小時以除去臟物、鉛、砷等物。

3.刷洗、烘干： 12 小時后立即用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干。

4.泡酸、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g ：濃硫酸 200ml ：蒸餾水 1000ml ）浸泡12小時，然后從酸缸內撈出器皿用自來水沖洗 15 次，最后蒸餾水沖洗 3-5 次和用雙蒸水過 3 次。

5.烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙（油光紙）包裝。

6.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內蓋好蓋子，打開開關和安全閥，當蒸氣成直線上升時，關閉安全閥，當指針指向 15 磅 時，維持 20-30 分鐘。

7.高壓消毒后烘干

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