固定細胞的PI單染色法

方法一

1．收集細胞（1～5）×106個，500～1000r/min離心5min，棄去培養液。
2．3ml PBS洗一次。
3．離心去PBS，加入冰預冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。
4．離心棄去固定液，3ml PBS重懸5min。
5．400目的篩網過濾1次，500～1000r/min離心5min，棄去PBS。
6．用1ml PI染液，4℃避光30min。
7．流式細胞儀檢測：PI用氬離子激發熒光，激發光波波長為488nm，發射光波波長大于630nm，產生紅色熒光，可分析前散射光對側散射光的散點圖及PI熒光的直方圖。

方法二

1．收集細胞（1×106個），500～1000r/min離心5min，棄去培養液。
2．1ml PBS/FCS洗一次。
3．500～1000r/min離心5min去PBS/FCS，加入500μl PBS/FCS和500μl的多聚甲醛固定液，輕輕混勻，在4℃下固定4min。
4．500～1000r/min離心5min棄去固定液，室溫加入含0.2％ Tween的PBS 1ml，37℃孵育15min。
5．1ml PBS/FCS洗3次，每次5min。
6．400目的篩網過濾1次。
7．500～1000r/min離心5min去PBS/FCS，用1.0ml PI染液，4℃避光至少30min。染色在24h之內皆可行，流式細胞儀分析。