誘導(dǎo)多能干細(xì)胞iPSC培養(yǎng)基質(zhì)如何轉(zhuǎn)換注意事項(xiàng)

滋養(yǎng)層細(xì)胞在胚胎干細(xì)胞 的培養(yǎng)中扮演了雙重角色，同時(shí)提供了生長(zhǎng)底物和生長(zhǎng)因子。后者我們能用外源的生長(zhǎng)因子來(lái)替代。至于前者，一些研究人員也開(kāi)始用基底膜基質(zhì)來(lái)替代，如BD的Matrigel。當(dāng)然，人類胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSC)的最佳培養(yǎng)條件是成分完全明確，并且完全人源性的。

為此，StemCell Technologies公司就推出了StemAdhere? Defined Matrix，該產(chǎn)品含有一種人源重組蛋白，可用于人類多能干細(xì)胞的長(zhǎng)期培養(yǎng)。

StemCell 公司推薦使用該基質(zhì)膠作為Matrigel的替代品，雖然其價(jià)格會(huì)比Matrigel貴30%-40%，但它成分明確，并且可與TeSR?2培養(yǎng)基共同使用，帶來(lái)一個(gè)完全確定、無(wú)動(dòng)物蛋白、不依賴滋養(yǎng)層的培養(yǎng)系統(tǒng)。

當(dāng)然，從Matrigel轉(zhuǎn)換到StemAdhere，iPS C需要一個(gè)適應(yīng)過(guò)程，Stemcell公司也開(kāi)發(fā)出一個(gè)優(yōu)化步驟，便于培養(yǎng)的轉(zhuǎn)換。據(jù)專家介紹，iPSC最初會(huì)經(jīng)歷一個(gè)“適應(yīng)期”，正如之前從滋養(yǎng)層細(xì)胞到無(wú)滋養(yǎng)層條件的轉(zhuǎn)換。

在剛剛轉(zhuǎn)換到StemAdhere 時(shí)，iPSC培養(yǎng)物的粘附和擴(kuò)增速率都低于預(yù)期。在2-4代后，生長(zhǎng)和鋪板效率通常會(huì)改善，并達(dá)到之前的水平。詳細(xì)步驟請(qǐng)點(diǎn)擊此處查看。

Stemcell的專家還給出了5條建議，讓您優(yōu)化從Matrigel到StemAdhere的培養(yǎng)轉(zhuǎn)換。

1.在傳代StemAdhere上培養(yǎng)的iPSC細(xì)胞時(shí)，使用Gentle Cell Dissociation Buffer，而不是dispase解離酶。

2.使用非組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)板，因?yàn)镾temAdhere蛋白不能很好地粘附在組織培養(yǎng)處理的塑料制品上。

3.在傳代前仔細(xì)檢查您的培養(yǎng)物，排除分化區(qū)域。

4.在最初的轉(zhuǎn)換步驟中，以1:1的比例分割細(xì)胞，以確保高水平的粘附。

5.在后續(xù)傳代時(shí)，分割比例可更高一些，以維持最佳的細(xì)胞密度。

專家還特別提醒，因基質(zhì)組分的差異，iPSC在適應(yīng)StemAdhere時(shí)，形態(tài)上會(huì)有輕微的改變。這是很正常的，StemAdhere上的克隆將繼續(xù)表達(dá)高水平的多能性標(biāo)志物，維持正常的核型，并保留了在畸胎瘤實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生三個(gè)胚層的能力。

Stemcell公司的產(chǎn)品包括：檢測(cè)造血干細(xì)胞功能的半固體培養(yǎng)基MethoCult?和MyeloCult?系列，培養(yǎng)和鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞的MesenCult?系列，培養(yǎng)和分析神經(jīng)干細(xì)胞的NeuroCult?系列，培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞和多能干細(xì)胞的Es-Cult?系列產(chǎn)品，可以分選各種細(xì)胞的免疫磁性分選系統(tǒng)EasySep?，全自動(dòng)細(xì)胞分選儀RoboSep?，全自動(dòng)克隆挑選系統(tǒng)EasyPick?，及與其配套使用的ClonaCell?-HY試劑等等。