細胞免疫熒光的操作步驟

1.細胞爬片;

2.4%多聚甲醛固定10min(固定細胞器 用預冷的70%甲醇+30%丙酮);

3.PBS 漂洗5min;

4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化處理);

5.PBS漂洗2次，每次5min;

6.1%BSA 封閉30min;

7.加入1%BSA稀釋的一抗，于37℃雜交2h;

8.PBS漂洗2次，每次5min;

9.加入1%BSA稀釋的二抗，于37℃雜交1h;

10.PBS漂洗2次，每次5min;

11.5ug/ml DAPI染色2min;

12.抗淬滅封片劑封片。

抗淬滅封片劑:

2.5% DABCO (w/v)

50mM Tris(pH8.0)

90%甘油