人的外周血淋巴細胞培養實驗
一、 實驗目的
掌握人體微量血液體外培養制備染色體 標本的方法。
二、實驗原理
人外周血液中的小淋巴細胞，幾乎都處在G1期（G0期），一般情況下是不再分裂的，在培養液中加入植物凝血素（PAH）時，這種小淋巴細胞受刺激轉化為淋巴母細胞，隨后進入有絲分裂。這樣經過短期培養，秋水仙素的處理，低滲和固定，就可獲得大量的有絲分裂細胞。本方法已為臨床醫學、病毒學、藥理學、遺傳毒理學等方面的廣泛應用。
三、實驗材料
儀器設備
5毫升滅菌注射器，離心管，吸管，試管架，量桶，培養瓶，試劑瓶，酒精燈，燒杯，天平，離心機，恒溫培養箱。
材料和試劑
1．人的外周血淋巴細胞。
2．Giemsa染色液原液：配方是0.5g Giemsa＋33ml甘油＋33ml甲醇。配制方法是：在研缽內先用少量甘油與Giemsa粉混合，研磨至無顆粒為止，再將其余甘油倒入，攪拌后56oC水浴保溫2小時，再加入甲醇，攪勻后保存于棕色瓶中。
3．Giemsa染色液應用液：用0.1M pH7.4磷酸緩沖液稀釋Giemsa染色液原液10倍。
四、實驗步驟
1. 培養液的分裝：在無菌室內或接種罩內，用移液管將培養液和其他各試劑分裝入10毫升培養瓶中，每班8~10瓶，每瓶量為：
1640培養液4毫升
小牛血清1毫升
PHA0.2毫升
肝素0.05毫升
雙抗（青霉素和鏈霉素）：終濃度為：100單位/毫升
pH：7.2~7.4用3.5%碳酸氫鈉調節
