愈傷組織的分化

一、目的要求
了解愈傷組織再分化原理，學習誘導愈傷組織分化的方法。

二、基本原理
愈傷組織在離體培養過程中，組織和細胞的潛在發育能力可以在某種程度上得到表達，伴隨著反復的細胞分裂 ，又開始新的分化。將脫分化的細胞團或組織經重新分化而產生出新的具有特定結構和功能的組織或器官的一種現象，稱為再分化。

在一定的培養條件下，愈傷組織通過分化可以形成苗或根的分生組織甚至是胚狀體，繼而發育成完整的小植株（圖3－1）。

三、器材
1．材料：
非洲紫蘿蘭葉片愈傷組織，胡蘿卜塊根胚性愈傷組織。
2．實驗用品：
(1) NAA 、BA、瓊脂 、蔗糖、2 ,4-D、IBA 等
(2) 分化培養基Ⅰ（生芽）: MS + NAA0.1 mg/L＋BA 1 mg/L＋蔗糖3g/L＋瓊脂0.8g/L，pH 5.8。
(3) 分化培養基Ⅱ（生根）: MS + IBA1 mg/L＋蔗糖3g/L＋瓊脂0.8g/L，pH 5.8。
3．器具：各種接種工具、超凈工作臺。

四、操作步驟
1. 按照培養材料的要求，分別配制誘導愈傷組織生芽培養基或生根培養基。
2. 培養基和接種工具消毒，準備無菌水和無菌紙。
3. 在酒精燈旁，小心從愈傷組織容器瓶中，挑選出愈傷組織3～5 塊，放置到分化培養基中，蓋上蓋后寫上接種日期、外植體名稱和培養基成分。
4. 在培養室中培養，2 周后統計愈傷組織分化情況。

五、實驗報告
1．記錄胡蘿卜肉質根胚性愈傷組織或非洲紫羅蘭葉片愈傷組織，在接入分化培養基培養2 周后新生芽發生和生長的狀況，計算分化率。
分化率（% ) = （生芽愈傷組織塊數／接種愈傷組織總塊數）×100％
2. 記錄愈傷組織培養10 天后，發生不定根的情況，計算生根率（%):
生根率（% ) =（生根愈傷組織塊數／接種愈傷組織總塊數）×100%