熒光檢測CMC

1． 用含 10 ％小牛血清和抗生素的 RPMI-1640 培養液將 K562 細胞配成 1 × 10⁵ /ml 濃度。用同樣培養液將 PBMC 配成 1 × 10⁶ /ml 濃度。

2． 取 96 孔圓底細胞培養板，每孔加 0.1ml K562 細胞懸液；每孔加適量 PBMC 使效靶比為 1 ： 1 ～ 5 ： 1 ，每種處理 3 個復孔； 3 個對照孔只加效應細胞； 8 個對照孔只加靶細胞； 4 個對照孔只加細胞培養液。每孔加 20 μ l Alamar Blue ；每孔總量為 0.2ml 。

3． 在 37 ℃ 5 ％ CO₂ 的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養 24 小時。

4． 直接在熒光檢測儀上檢測熒光強度，激發波長 530nm ，發射波長 590nm 。各孔熒光強度值應減去培養液對照熒光強度的平均值，各復孔熒光強度的平均值記為 AF 。按下式計算特異性殺傷百分比：

特異性殺傷（％）＝ 100 × [AF 靶細胞對照－（ AF 實驗孔－ AF 效應細胞對照） ]/AF 靶細胞對照