RNase抑制劑

RNA 酶污染是全體從事 RNA 相關實驗的人員的頭號公敵。即使是100度高溫或者是高壓滅菌也不能完全滅活無孔不入的 RNases 。因而相關的實驗中往往要用到RNA 酶抑制劑。

最常用的 RNA 酶抑制劑 Human Placental ribonuclease inhibitor （ HPRI ）是一種蛋白質，可與多種 RNA 酶（包括 RNases A, B, C 類）非共價結合成為等摩爾復合物， 抑制RNA 酶活性。 HPRI 需要在 DTT 存在的條件下保持最大活性。包括 RNasin, SUPERase.in, RIP 等幾個知名品牌的 RNA 酶抑制劑都屬于這個類型。

Prime RNase Inhibitor 是一種全新的非人源的 RNase 抑制劑，和HPRI 一樣，能夠非共價結合并抑制 RNases A, B, C 類的 RNA 酶活性而不影響RNases T1, T2, H, U1, U2 和 CL3 的活性，因而不會干擾cDNA合成，SP6/ T7， Hela細胞提取物系統的RNA 體外轉錄，以及在兔網織紅細胞裂解液或者是麥胚提取物中進行的體外翻譯。

應用范圍：

1.體外轉錄

2.體外翻譯

3.第一和第二鏈cDNA合成

4.在非變性條件下純化RNA 和mRNA ，

5.RT-PCR ，特別是單細胞 RNA 的 RT-PCR

6.RNA 結合蛋白的分 離

7.gel retardation assays

8.nuclear run-on transcription assays

9.polysome distribution analysis

優點：

比HPRI 更高效率的抑制 RNase 活性，一個單位的 Prime RNase Inhibitor 可以抑制5ng RNase 90 % 以上的活性，而同樣情況下HPRI只能抑制50 % 的活性。

完全不需要加入DTT以維持最高活性。在更寬的pH值范圍，更寬的 DTT 濃度范圍和溫度范圍保持穩定

可用于非變性條件的 RNA 純化過程，例如可用于帶有 1%Nonidet 溶液的 RNA 抽提試劑，或者是單細胞 RNA 純化和 RT-PCR

在變性條件下不會釋放出已經結合的RNase。

實際上在沒有DTT的條件下 Prime RNase Inhibitor 的活性更高，而在2 0mM DTT 下 Prime RNase Inhibitor 仍然有90 % 以上的活性。由于 Prime RNase Inhibitor 是一種蛋白質，所以應該保存于 -20 度，在 -70 度條件下會導致蛋白變性。

FAQ ：

已經加入Prime RNase Inhibitor 后的 RNA 樣品應該如何保存？

A ：應該在 -20 度保存。

Prime RNase Inhibitor 成分是什么？是否 HPRI/ 或者 RNasin Ribonuclease Inhibitor 的另一版本？

A ：是一種非人源蛋白。由于商業秘密不能透露。但是是完全不同類型的另一種蛋白。并非重組蛋白。

Prime RNase Inhibitor 是否適用于病毒 RNA 的 RT-PCR ？

A ：當然適合