動物總RNA的提取

實驗目的
  學習從動物組織中提取RNA的原理和方法。
實驗原理
  RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的RNA必須最大限度地抑制提取過程中內源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解。高濃度變性劑TRIzol，可溶解蛋白質，破壞細胞結構，使核蛋白與核酸分離，失活RNA酶，所以RNA從細胞中釋放出來時不被降解。細胞裂解后，除了RNA，還有DNA、蛋白質和細胞碎片，通過氯仿、異丙醇等有機溶劑處理得到純化、均一的總RNA。
實驗 儀器 和材料
低溫冷凍離心機、烤箱、制冰機、移液器、冰箱，水平電泳槽、電泳儀、勻漿器、TRIzol、氯仿、異丙醇、75％乙醇（DEPC H ₂ O）配制、DEPC H ₂ O
實驗步驟
1.  取50－100mg（新鮮或－70℃及液氮中保存的組織均可）置1.5ml勻漿器中，加入1ml TRIzol充分勻漿，室溫靜置5min。
2.  加入0.2ml氯仿，振蕩15s，靜置2min。
3.  4℃離心，12000g×15min，取上清置另一1.5ml離心管中。
4.  加入0.5ml異丙醇，將管中液體輕輕混勻，室溫靜置10min。
5.  4℃離心，12000g×10min，棄上清。
6.  加入1ml75％乙醇，輕輕洗滌沉淀。4℃離心，7500g×5min，棄上清。
7.  晾干，加入適量的DEPC H ₂ O溶解（65℃促溶10～15min）。
8.  快速電泳檢測RNA完整性。
注意事項
    1.樣品量和TRIzol的加入量一定要按照步驟1的比例，不能隨意增加樣品量或減少TRIzol量，否則會使內源性RNase的抑制不完全，導致RNA降解。
    2.實驗過程中必須嚴格防止RNase的污染。
3.所有的玻璃器皿均應在使用前于180℃的高溫下干烤6h或更長時間。
4.塑料器皿可用0.1％DEPC水浸泡或用氯仿沖洗。
5.配制的溶液應盡可能的用0.1％DEPC在37℃處理12h以上，然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的 試劑 ，應當用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制，然后經0.22um濾膜過濾除菌。