細胞增殖生長方面實驗-細胞計數法

原理

細胞計數法：細胞計數法是測定細胞絕對增長數值常用最簡便的方法。一般過程為接種21 孔/24 孔板細胞（如用培養瓶時則21 瓶）。分7 組，每組3 孔（或瓶），培養一周，期間逐日檢測一組，計數。把7天中的細胞數值繪成圖，即為細胞生長曲線。

材料與儀器

細胞
胰蛋白酶
培養瓶 恒溫箱 試管 細胞自動計數器

步驟

1.  懸液制備
取待測生長狀態良好細胞，增長至接近匯合時，向培養瓶內加1 ml 0.25 %胰蛋白酶液，37 ℃溫箱中消化，至細胞接近脫離瓶壁前吸出消化液、加新的培養液、輕吹打制備成細懸液、計數；

2.  接種
向每孔中接種等量細胞，置溫箱中培養；把培養瓶中營養液倒入試管中并記錄下毫升量；

3.  計數檢測
從次日起，即開始檢測第一組每個孔（或瓶）中的細胞總數，用計算盤或用細胞自動計數器計數，取3 個孔的均值，如此至第7 組結束；

4.  繪圖
用座標圖紙繪成生長曲線。

注意事項

1.  計數法簡便易行，但不夠精確，約有20 %～30 %的誤差。為提高準確性，每孔也應計算2～3 次，則總和每組計算總次數達6 次～12 次，均值可能更為精確。

2.  細胞數量增加 1 倍的時間稱倍增時間，亦可從細胞生長曲線中測知。

常見問題

細胞增殖生長力是判定細胞活力的重要指標，有多種顯示方法，除實驗的細胞計數法之外，還可以進行細胞分裂指數的測定。細胞分裂是細胞增殖的方式，能比較確切地反映細胞增殖度。細胞分指數是指被測細胞群每 1000 個細胞中的分裂細胞數(分裂細胞/1000)，用以表示細胞增殖旺盛程度。因此在檢測中需觀察和記錄群體中 1000 個細胞中的細胞分裂相數。

細胞被制成分散的懸液后，以低密度(2～5 個細胞/cm2)被接種到底物上，貼壁并能存活生長形成細胞小群(克隆)的細胞百分數值稱接種存活率，用以表示細胞群的活力。由于檢測接種存活率時是借觀察克隆(通常為 16～50 個細胞)形成情況，又因每個克隆都來自一個細胞，因此也稱克隆形成率。細胞接種存活率與細胞活力成正比。

近年流式光度儀的發展已成為檢測細胞增殖周期主要手段，可進行多項柱測，如細胞周期時相、DNA 合成強度、持續時間等，效果極好，已取代了應用同位素等繁瑣方法。培養細胞是非常適用于做流式細胞儀檢測的對象，程序簡單、怏速、效果準確。流式細胞儀除能檢測細胞周期時相變化和反應 DNA 合成情況外，也可借以了解染色體倍性；另外尚可結合熒光免疫法對細胞膜進行分析等。

來源《組織培養和分子細胞學技術》（北京出版社）