考馬斯亮藍染色法

原理

熒光免疫染色法顯示細胞骨架具有清晰優點，但操作過程較復雜；考馬斯亮藍染色法簡便易行，清晰度稍差，但如分化處理適當能提高清晰度。

材料與儀器

細胞
磷酸二氫鈉 磷酸氫二鈉 戊二醛 甲醇 冰醋酸 蒸溜水 考馬斯亮藍
培養瓶

步驟

1.  固定液準備

0.1 M 磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O） 14.0 ml

0.1 M 磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O） 36.0 ml

蒸餾水 50.9 ml

（以上各液相混合后再加戊二醛）

25 %戊二醛 50.0 ml

染色液：

甲醇 46.5 ml

冰醋酸 7.0 ml

蒸溜水 46.5 ml

（以上各液相混合后再加染）

考馬斯亮藍 0.2g

2.  培養細胞
用支持物蓋片培養法；

3.  固定
從培養瓶中取出細胞蓋片，投入固定劑中固定15 分鐘；

4.  漂洗
取出蓋片先置蒸餾水中漂洗2 分鐘，再用蒸餾水洗兩次，每次1 分鐘；

5.  染色
在考馬斯亮藍液中染色60 分鐘；

6.  按4程序漂洗；

7.  分化
置入含甲醇冰醋酸液碟皿中（不含染料），在倒置顯微鏡直接窺視下，見細胞質內微絲逐漸明顯，背地清亮時便終止；

8.  漂洗
按4處理；

9.  脫水→各度酒精→二甲苯；

10.  封片
用樹膠封固；

11.  結果
細胞內微絲呈藍色，如分化較好時背地清亮，反之會影響微絲的清晰度。