骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

材料與儀器

肌組織
Hanks 胰蛋白酶 血清 胎汁
紗布

步驟

動物胚或幼體的大腿肌組織為最好的培養(yǎng)材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠（Wistar 大鼠更好）。

1.  殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成0.3~0.5 厘米小塊；

2.  用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消化，無菌紗網(wǎng)或紗布濾過，合成培養(yǎng)基加10 %小牛（或馬）血清培養(yǎng)，為促進(jìn)分分蘗節(jié)經(jīng)可加1 %的胎汁；

3.  細(xì)胞接各量為2×106 /皿；接種在膠原或明膠的底物上能促進(jìn)細(xì)胞分化。明膠制備比較簡單，常用Hanks液配的0.01 %明膠。

細(xì)胞接種率約為50 %；細(xì)胞生長開始呈紡錘形，培養(yǎng)50~52 小時后將出現(xiàn)融合形成肌細(xì)胞狀多核纖維。數(shù)日后融合停止，此時能觀察到橫紋。一般在融合后二三天內(nèi)能見到收縮現(xiàn)象；因收縮運(yùn)動有時可導(dǎo)致細(xì)胞從底物脫離。在初代培養(yǎng)時，如發(fā)現(xiàn)成肌細(xì)胞（Myoblast）所占比例很少時，根據(jù)成肌細(xì)胞比非成肌細(xì)胞貼壁慢的特點(diǎn)，可采用胰蛋白酶消化后反復(fù)貼壁法，淘汰掉非肌細(xì)胞成分。骨骼肌細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，使之成為有限細(xì)胞系；但易失去分化現(xiàn)象；表現(xiàn)為成肌細(xì)胞不發(fā)生融合，從而不能形成多核肌纖維和出現(xiàn)收縮現(xiàn)象，只有培養(yǎng)條件良好時，才可發(fā)生肌細(xì)胞收縮變化。