纖維素酶酶活的測(cè)定方法
問(wèn)：因我做的是非淀粉多糖酶制劑方面的課題，中間要測(cè)纖維素酶的活性，我用了兩種方法測(cè)，但測(cè)的結(jié)果還是與標(biāo)定的酶活性有很大的差距，不知道問(wèn)題出在那里？請(qǐng)高人指點(diǎn)！
答：酶活性可分為全活性和比活性兩種。酶的全活性為每克干物質(zhì)每分鐘釋放的相應(yīng)糖的微摩爾（μmol)數(shù) , 單位為μmol/gDM min。酶的比活性為每毫克蛋白每分鐘釋放的相應(yīng)糖的微摩爾（μmol)數(shù)，單位為μmol/gProtein min。以下是我用過(guò)的方法：
全活性：取4支15ml試管，每支試管中加入1.5 mL.39℃預(yù)熱的2%羧甲基纖維素鈉(內(nèi)含0.1 mg/mL硫柳汞)，其中1號(hào)試管為試劑空白，加入0.01 M，pH6.8磷酸鈉緩沖液1 ml; 2號(hào)試管為酶樣空白，什么也不加;3,4號(hào)試管為酶樣平行樣，各加入1 ml酶液，4支試管同時(shí)放入39℃水浴回旋震蕩培養(yǎng)60 min。培養(yǎng)后4支試管立即加入3 mL DNS (3,5-一硝基水楊酸溶液)，再在2號(hào)試管中加入1 ml預(yù)先制備好的酶液，用旋渦震蕩儀混勻后在開水浴中煮沸5 min，取出后用水冷卻5min。以1號(hào)試管為空白，在紫外分光光度計(jì)上560 nm處進(jìn)行比色。
以D-葡萄糖作為標(biāo)樣，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：稱取無(wú)水葡萄糖1.00g，溶于100 mL容量瓶中，制成濃度為10 mg/mL葡萄糖溶液，再?gòu)闹幸来挝?，2，3，4，5，6 ml各溶于100 mL容量瓶中，制成濃度為0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mg/mL溶液，吸取1.0 mL葡萄糖溶液加入3 mL DNS,煮沸5 min，冷卻5 min于560 nm處比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
比活性：用考馬斯亮藍(lán)法確定酶液的蛋白濃度，使用牛血清白蛋白做標(biāo)樣。其他的與全活性相同。
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