小鼠ELISA試劑盒使用方法
小鼠ELISA試式劑盒實(shí)驗(yàn)操作注意要點(diǎn):
血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性?，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法EISA中可使本底加深。般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混句宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。
昆濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存按小鼠ELISA試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ILISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)里的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測里較正。小鼠ELISA試劑盒使用方法:
1、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000x離心30分鐘去除顆粒。
2、細(xì)胞上清液:1000x離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
3、組織勻漿:將組織加入適里鹽水搗碎。1000x離心10分鐘，取上清液。
4、血清:操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
5、保存:如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶加或高加脂伽。如果血清中大里顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
對(duì)于科研人員來說小鼠LISA試劑盒原理和操作步騾并不陌生，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，操作過程中夾雜著洗滌和封閉步驟。如果操作不合理，也會(huì)很大程度上影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)我們是否能獲得有意義而且準(zhǔn)確的信息，這在很大程度上取決于操作結(jié)果的正確與否。
