細(xì)胞實驗注意事項及配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基操作步驟
細(xì)胞實驗全程注意事項
1. 無菌操作是重中之重！！！細(xì)胞培養(yǎng)對無菌條件比較苛刻，實驗人在進(jìn)行整個細(xì)胞實驗的無菌意識一定要強(qiáng)，否則一個不小心，發(fā)生細(xì)菌污染，輕則浪費(fèi)細(xì)胞，重則污染整個培養(yǎng)箱。
2. 實驗人員進(jìn)入細(xì)胞房前應(yīng)該換上干凈的鞋子、白大褂、手套和口罩。
3. 所有耗材放入工作臺前都需用75%酒精進(jìn)行消毒，雙手進(jìn)入工作臺前也需要用75%的酒精進(jìn)行消毒。
4. 進(jìn)行實驗前應(yīng)先對工作臺進(jìn)行紫外滅菌30min以上，并將所有需要用到的耗材放到工作臺上一起進(jìn)行紫外滅菌（簡稱照臺）。
5. 使用酒精燈的實驗室需要特別注意安全，剛噴灑完酒精的物品不要靠近酒精燈，有生物安全柜的實驗室則不需要使用酒精燈。
6. 進(jìn)行實驗前應(yīng)先用酒精棉擦拭工作臺，所有操作都應(yīng)在靠近酒精燈火焰下方進(jìn)行（有生物安全柜的則不需要使用酒精燈）。
7. 實驗結(jié)束后應(yīng)及時將垃圾處理，再用酒精棉擦拭工作臺，對工作臺進(jìn)行紫外滅菌30min以上。
配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
以下配制的是基礎(chǔ)培養(yǎng)基，主要用于普通細(xì)胞的增殖培養(yǎng)，如小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞，內(nèi)含2%的雙抗和10%的胎牛血清。個別特殊細(xì)胞需要配制特殊的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
01 準(zhǔn)備材料：50mL離心管、封口膜、鑷子、移液槍、DMEM培養(yǎng)液、雙抗、胎牛血清等。
02 操作步驟：
1. 用移液槍吸取44mL的DMEM培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移至離心管中。注意槍頭不要碰到培養(yǎng)液瓶口。
2. 用移液槍吸取1mL的雙抗，轉(zhuǎn)移至離心管中，吹打混勻。
3. 用移液槍吸取5mL的胎牛血清，轉(zhuǎn)移至離心管中，吹打混勻。
4. 用封口膜將離心管封口，置于4℃保存。
5. 雙抗、胎牛血清置于-20℃長期保存，置于4℃短期保存。
6. DMEM培養(yǎng)液置于4℃保存。
03 注意事項：
1. 配制好的培養(yǎng)基盡快使用，一般可存放三個月左右，放置久了里面的物質(zhì)可能會失活，培養(yǎng)出來的細(xì)胞狀態(tài)就不這么好了。
2. 使用移液槍時，注意槍頭不要碰到任何東西，如果碰到了，不要猶豫馬上丟棄。
3. 雙抗、胎牛血清應(yīng)避免反復(fù)凍融，可根據(jù)需要將其分裝保存。
