薄層層析原理/條件/操作/應(yīng)用
一、薄層色譜概念
最常用的薄層色譜也屬于液-固吸附色譜。同柱色譜不同的是吸附劑被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂層。干燥后在涂層的一端點(diǎn)樣，豎直放入一個(gè)盛有少量展開(kāi)劑的的有蓋容器中。展開(kāi)劑接觸到吸附劑涂層，借毛細(xì)作用向上移動(dòng)。與柱色譜過(guò)程相同，經(jīng)過(guò)在吸附劑和展開(kāi)劑之間的多次吸附-溶解作用，將混合物中各組分分離成孤立的樣點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)混合物的分離。
除了固定相的形狀和展開(kāi)劑的移動(dòng)方向不同以外，薄層色譜和柱色譜在分離原理上基本相同。由于薄層色譜操作簡(jiǎn)單，試樣和展開(kāi)劑用量少，展開(kāi)速度快，所以經(jīng)常被用于探索柱色譜分離條件和監(jiān)測(cè)柱色譜過(guò)程。
二、薄層色譜條件
⑴固定相選擇
柱色譜中提到的吸附劑都可以用作為薄層色譜的固定相，分離性能及使用選擇同柱色譜的選擇原則相同
一般用于薄層色譜時(shí)，要求吸附劑的粒度更小。商品吸附劑區(qū)分為色譜級(jí)(用于柱色譜)和薄層色譜級(jí)(用于薄層色譜)。
⑵展開(kāi)劑選擇
薄層色譜展開(kāi)劑的選擇和柱色譜一樣，主要根據(jù)樣品中各組分的極性、溶劑對(duì)于樣品中各組分溶解度等因素來(lái)考慮。展開(kāi)劑的極性越大，對(duì)化合物的洗脫力也越大選擇展開(kāi)劑時(shí)，除參照表列溶劑極性來(lái)選擇外，更多地采用試驗(yàn)的方法，在一塊薄層板上進(jìn)行試驗(yàn)：
①若所選展開(kāi)劑使混合物中所有的組分點(diǎn)都移到了溶劑前沿，此溶劑的極性過(guò)強(qiáng);
②若所選展開(kāi)劑幾乎不能使混合物中的組分點(diǎn)移動(dòng)，留在了原點(diǎn)上，此溶劑的極性過(guò)弱。
當(dāng)一種溶劑不能很好地展開(kāi)各組分時(shí)，常選擇用混合溶劑作為展開(kāi)劑。先用一種極性較小的溶劑為基礎(chǔ)溶劑展開(kāi)混合物，若展開(kāi)不好，用極性較大的溶劑與前一溶劑混合，調(diào)整極性，再次試驗(yàn)，直到選出合適的展開(kāi)劑組合。合適的混合展開(kāi)劑常需多次仔細(xì)選擇才能確定。
⑶相對(duì)移動(dòng)值從點(diǎn)樣原點(diǎn)開(kāi)始到展開(kāi)后的溶劑前沿，是溶劑的移動(dòng)距離，記為lo，混合物中各組分的移動(dòng)距離分別記為l1，l2，l3…。
⑷顯色
分離的化合物若有顏色，很容易識(shí)別出來(lái)各個(gè)樣點(diǎn)。但多數(shù)情況下化合物沒(méi)有顏色，要識(shí)別樣點(diǎn)，必須使樣點(diǎn)顯色。通用的顯色方法有碘蒸氣顯色和紫外線顯色。
①碘蒸氣顯色：將展開(kāi)的薄層板揮發(fā)干展開(kāi)劑后，放在盛有碘晶體的封閉容器中，升華產(chǎn)生的碘蒸氣能與有機(jī)物分子形成有色的締合物，完成顯色。
②紫外線顯色：用摻有熒光劑的固定相材料(如硅膠F，氧化鋁F等)制板，展開(kāi)后在用紫外線照射展開(kāi)的干燥薄層板，板上的有機(jī)物會(huì)吸收紫外線，在板上出現(xiàn)相應(yīng)的色點(diǎn)，可以被觀察到。
有時(shí)對(duì)于特殊有機(jī)物使用專用的顯色劑顯色。此時(shí)常用盛有顯色劑溶液的噴霧器噴板顯色。
三、薄層色譜操作
⑴制板(以硅膠板為例)
選擇合適的玻璃板(經(jīng)常使用顯微鏡上的載玻片)，依次用水和乙醇洗凈，晾干。取適量薄層色譜用的硅膠，加適量蒸餾水調(diào)成糊。調(diào)制時(shí)慢慢攪拌，勿使產(chǎn)生氣泡。將糊倒在玻璃板上，搖動(dòng)攤平，晾干。使用前放入烘箱內(nèi)，在105-115oC左右烘干40-50分鐘。冷卻后使用。
⑵點(diǎn)樣
將試樣用最少量展開(kāi)劑溶解，用毛細(xì)管蘸取試樣溶液，在薄層板上點(diǎn)樣。在樣點(diǎn)上輕輕畫(huà)出一條平行于玻璃板底邊的細(xì)線。薄層色譜板載樣量有限，勿使點(diǎn)樣量過(guò)多。
⑶展開(kāi)
吹干樣點(diǎn)，豎直放入盛有展開(kāi)劑的有蓋展開(kāi)瓶中。展開(kāi)劑要接觸到吸附劑下沿，但切勿接觸到樣點(diǎn)。蓋上蓋子，展開(kāi)。待展開(kāi)劑上行到一定高度(由試驗(yàn)確定適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)高度)，取出薄層板，再畫(huà)出展開(kāi)劑的前沿線。
⑷顯色，計(jì)算Rf值
揮發(fā)干展開(kāi)劑，選擇合適的顯色方法顯色。量出展開(kāi)劑和各組分的移動(dòng)距離，計(jì)算各組分的相對(duì)移動(dòng)值。
四、薄層色譜應(yīng)用
⑴可用于判斷兩個(gè)化合物是否相同(同一展開(kāi)條件下是否有相同的移動(dòng)值);
⑵可用于確定混合物中含有的組分?jǐn)?shù);
⑶可用于為柱色譜選擇合適的展開(kāi)劑，監(jiān)視柱色譜分離狀況和效果;
⑷可用于檢測(cè)反應(yīng)過(guò)程。
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