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K562-Tax紫杉醇耐藥性細胞的培養(yǎng)說明

發(fā)布日期：2023-04-11 15:40:16

K562-Tax紫杉醇耐藥性細胞的培養(yǎng)說明

　一、細胞名稱：K562-Tax紫杉醇耐藥性細胞

　二、生長特性：懸浮

　三、細胞生長條件：
　　培養(yǎng)基   90%培養(yǎng)基DMEM
　　血清   10%FBS
　　溫度   37℃
　　空氣條件   5%CO2，95%AIR
　　凍存條件   培養(yǎng)基50%、血清40%、DMSO10%
　四、細胞接收后的操作流程與注意事項
　　1.細胞收到后建議在培養(yǎng)箱穩(wěn)定4小時左右再依據(jù)細胞密度，換液培養(yǎng)或傳代。
　　2.如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞及時離心，加15%血清的完全培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶中繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)2-3天。若3天后細胞都沒有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請及時聯(lián)系實驗室，技術(shù)人員會跟進解決。
　　3.貼壁細胞生長緩慢：適當(dāng)提高血清濃度（最高不超過20%），或可根據(jù)該細胞生長密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
　　4.生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)生長不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重新打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
　五、細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作）
　　1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3ml0.25%EDTA的胰酶消化（注意把握消化時間，通常控制在1~2min）。
　　2.鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁運動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让福?~8ml完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落、吹散。
　　3.取出部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液，待細胞密度達到70-80%時重復(fù)傳代操作或者凍存。
　　特別注意：（如使用公共實驗室或初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）
　　1.收到細胞后請盡快更換為含10%FBS的新鮮培養(yǎng)基，不建議使用原瓶中運輸用培養(yǎng)基。
　　2.細胞任何售后問題，均需拍照存檔并及時聯(lián)系客服。