乳鼠肝臟細胞原代培養

一周齡大鼠，斷頸處死，活力碘消毒,無菌取出肝臟，于無菌維持液中漂洗，用眼科剪仔細清除肝包膜,韌帶,沿肝邊緣剪切肝尖組織(繞開肝蒂等)轉入青霉素小瓶中，用眼科剪絞碎,剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，加入5倍體積無菌維持液,用滴管輕輕吹打,吸出上層血細胞

再用無菌維持液反復清洗3~5次，加入10倍體積無菌胰蛋白酶消化液,37℃消化，消化過程中不斷震蕩，至組織塊邊緣變薄(鏡下觀),離心(1000rpm,10分鐘)棄去上面酶液，用無菌維持液將組織塊清洗2~3次，加入新鮮無菌胰蛋白酶消化液重復上述步驟。

此時組織塊邊緣模糊，1000rpm離心10分鐘，取沉淀即為消化下的細胞，重新用無菌維持液懸浮，離心，洗1~2次，用20%生長液懸浮即得細胞懸液；

將消化過的組織塊重復消化5~6次至組織塊消化完全，重復以上操作，合并幾次所得細胞懸液，計數，調整細胞濃度為2×10 5 個細胞/mL，將細胞懸液接種于塑料培養瓶中，置于37℃，5%CO2，飽和濕度培養箱中培養。

培養48小時后，換新鮮配置的培養液培養5小時，可除去絕大部分血細胞及雜細胞，37℃，5%CO2，飽和濕度培養箱中培養，每隔3天換培養液，獲得單層肝細胞。

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