卵巢癌細胞的傳代

我所用的卵巢癌的細胞包括SKOV3、A2780、3AO、OVCAR3、HRA，幾種細胞的特性不完全一樣，但是我的傳代的步驟是基本一致的：

細胞生長至80%匯合時傳代，先倒掉培養液，加預先加好雙抗的生理鹽水或PBS 5-10ml（100ml培養瓶）后輕輕搖晃數次后倒掉，加0.25-0.35%的胰酶2ml，并使其分布均勻（這一點很重要，一定要注意工作臺是否平整，否則容易造成胰酶分布不均勻而細胞消化不同步），待細胞間隙變大時終止消化，加含10%血清的培養液（我用的是1640）4ml輕柔吹打，再按照需傳代的比例（1：2或1：3）補足培養液后分裝至2-3個培養瓶中。

若細胞碎片較多，可在消化后不倒掉胰酶直接加含血清的培養液吹打后500rpm離心5min，再用培養液重懸分瓶。消化所需的具體時間依細胞的種類和狀態而定，也和細胞的匯合程度有關，一般是80%匯合時最容易消化，若細胞長得太滿，消化時間要適當延長，必要時可以將培養瓶移至培養箱內消化。另外，一次性培養瓶要比玻璃培養瓶所需的消化時間稍長。

胰腺癌細胞我所養的是CAP，感覺不太好伺候，尤其是傳代時很困難。我一般是在倒掉培養液后，加生理鹽水或PBS沖洗，而后加一次胰酶作用3-5分鐘，倒掉胰酶，再加2-3ml新的胰酶繼續消化，這樣加兩次的效果好一些，但是吹打的時候還是很困難，總感覺細胞的貼壁能力太強了，明明看見細胞已經變圓了，可就是吹不下來。現在想想可能在胰酶中加EDTA會好一些。

相比而言，還是HELA好養，細胞的狀態一直不錯，而且消化時也很容易。

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