流式細胞計PI染色死細胞

PI能夠插入雙鏈DNA中。它被活細胞排斥但能穿透正在死亡或已經死亡的細胞的細胞膜。

Ⅰ、材料

1、PI（e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA）

2、緩沖體系：1×PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scientific,Santa Ana,CA)+2%新鮮小牛血清＋0.1%疊氮鈉

A、 PI緩沖液

用緩沖液將PI溶解至終濃度為1mg/ml中，于4℃下密封避光保存1個月。

B、 PI濃縮液

用緩沖液將PI溶解至終濃度為500mg/ml，于4℃下密封避光保存。我們已經檢測過將PI濃縮液放置數月后，并無觀察到染色活性的丟失。

Ⅱ、方法：

將樣品細胞按程序描述的方法用FITC標記的單克隆抗體進行單色染色。

A、 在最后的洗滌步驟后，將樣品細胞懸浮于PI緩沖液中，于4℃下密封避光保存以備通過流式細胞儀分析；

B、 在最后的洗滌步驟后，如前述將樣品細胞懸浮后備用。如果您想檢測樣品細胞活力，在每一管中加入2μl的PI濃縮液，混勻。將樣品置于4℃下密封避光保存以備流式細胞儀分析。

注意：此法并不適用于甲醛固定的樣品。在根據Sasaki等人的方法（Cytometry 8:413,1987）用PE標記的抗體對樣品進行染色時可以適用此方法。然而，由于PI和PE的發射光譜的廣泛交迭，因此本方法適于用7-氨基-放線菌素D將死細胞加以區分。