RNAi的作用機(jī)制

現(xiàn)有的RNAi作用機(jī)制模型包括起始階段和效應(yīng)階段:

1）起始階段：dsRNA進(jìn)入細(xì)胞的方式可以是外源導(dǎo)入或者轉(zhuǎn)基因、病毒感染等。引入的dsRNA被 核酸酶 RNaseⅢ家族中特異識(shí)別dsRNA的Dicer酶,以一種ATP依賴的方式逐步切割成長約21-23nt的由正反義鏈組成的雙鏈小分子干擾RNA(siRNA)，且每條單鏈的3’端都帶有2個(gè)突出的非配對(duì)堿基（多數(shù)是UU）。siRNA又被稱為引導(dǎo)RNA（guide RNA）,是識(shí)別靶RNA的標(biāo)志。siRNA的生成啟動(dòng)了RNAi反應(yīng)。

2)效應(yīng)階段：siRNA結(jié)合一個(gè)核酶復(fù)合物，形成所謂的RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RNA-induce silencing complex,RISC）。這個(gè)核酶復(fù)合物由內(nèi)切 核酸酶 、外切核酸酶、解旋酶和同源RNA搜索活性蛋白四種成分組成。激活該復(fù)合物需要一個(gè)ATP依賴的將siRNA解雙鏈的過程，活化以后的RISC定位到與siRNA中的反義鏈互補(bǔ)的靶mRNA轉(zhuǎn)錄本上，并在距離siRNA3　’端12個(gè)堿基的位置切割mRNA。另外，通過遺傳分析方法發(fā)現(xiàn)，線蟲中的RDE-1、MUT-7和DNA/RNA解旋酶及其他PAZ/Piwi蛋白也參與到該階段的反應(yīng)。