用于基因芯片分析的細(xì)胞RNA的抽提

一、實(shí)驗(yàn)試劑：

Trizol試劑（Invitrogen公司），PBS緩沖液；

二、具體過程：

1、細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，若是貼壁細(xì)胞，可以用移液器吸去培養(yǎng)基，并加入3ml左右的PBS洗一次（需要注意的是從冰箱中取出的PBS緩沖液溫度要盡量回復(fù)到室溫，避免給細(xì)胞冷的刺激）。

吸去PBS后，即可加入適量的Trizol試劑，Trizol的量一般是每10cm 2 的面積加1ml的Trizol；若是懸浮細(xì)胞，可以進(jìn)行離心，吸去上層的培養(yǎng)液，加入適量的Trizol，一般是5-10×10 6 細(xì)胞加1ml的Trizol。加入Trizol后，用移液器反復(fù)吹打細(xì)胞，使細(xì)胞充分裂解。

判斷Trizol加量是否合適的標(biāo)準(zhǔn)可以根據(jù)細(xì)胞溶解物的粘度來判斷。在細(xì)胞剛?cè)芙鈺r，可以發(fā)現(xiàn)有絲狀物出現(xiàn)，這是細(xì)胞的基因組DNA釋放出來了，若Trizol量合適，吹打幾次后，絲狀物會消失，液體粘稠性下降；若Trizol量過少，絲狀物往往一直存在，液體粘稠性大，可以繼續(xù)補(bǔ)加Trizol。

若Trizol的量過少，會導(dǎo)致抽提的RNA中有較多的基因組DNA污染。由于Trizol試劑中含有強(qiáng)烈的RNA酶抑制劑，因此細(xì)胞充分溶解在Trizol中后就不用擔(dān)心RNA的降解。

2、溶解了細(xì)胞的Trizol在室溫靜置10min后，轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中，后續(xù)可以按照Trizol試劑的標(biāo)準(zhǔn)操作抽提總RNA。也可以把此Trizol試劑保存在生物冰（低于15℃即可）郵寄給我們，由我們來完成后續(xù)的抽提過程。