支原體的檢測實(shí)驗(yàn)-低漲處理地衣紅染色觀察法
原理
本法為固定染色法，簡便易行，標(biāo)本可長期保存，不僅適于檢測支原體，亦可用于檢測真菌和細(xì)菌。
材料與儀器
細(xì)胞
培養(yǎng)液 枸櫞酸 Carnoy 地衣紅 冰醋酸 酒精
離心機(jī)
步驟
1. 取材
用支持物蓋片培養(yǎng)法或培養(yǎng)液均可；用培養(yǎng)液時(shí)，先吸取培養(yǎng)液1 毫升，500～800 轉(zhuǎn)/分，離心5 分鐘后去上清，余0.2 ml備用。
2. 低漲處理
用新鮮配制的0.5 %的枸櫞酸溶液，處理蓋片細(xì)胞或加入到1項(xiàng)0.2 ml中（懸液）置10 分鐘。
3. 固定
用新配制的Carnoy液固定兩次，共10 分鐘，取出蓋片涼干；如為培養(yǎng)液，則應(yīng)先離心棄上清固定液，余沉淀物0.2 ml，制成涂片2～3 張。
4. 染色
用2 %醋酸地依紅染5 分鐘
染液配法：地衣紅 2 g，冰醋酸 60 ml，加蒸餾水至100 ml，支原體和細(xì)胞被染成紫紅色，如染色過深可用 75 ％酒精脫色。
5. 封片
純酒精過三次，每次1 分鐘，封入Euparal 或樹膠中。鏡下觀察支原體呈暗紫色小體，附于細(xì)胞外或散在于細(xì)胞之間。
