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通過調節表達增加蛋白質溶解度
發布日期:2025-01-06 09:52:00


通過調節表達增加蛋白質溶解度


使用有效的生產啟動子和高濃度的誘導劑可以在折尋前發生蛋白質聚集。如果轉錄和翻譯速率降低,新生成的蛋白質在聚集之前將有更多的時間折魯。為了提高蛋白質的溶解性,可以調整以下幾個典型方面的表達。溫度:如果生產溫度降低到15-25 '℃,重組產生的蛋白質將更易溶解。降低的蛋白質收集、翻譯、轉錄和細胞分裂速率是由于在較低溫度下細胞過程變慢。當表達特定蛋白質的溫度降低時,易受蛋白水解影響的蛋白質的分解速度減慢。引發劑的效力:重組蛋白的溶解性和活性可以通過降低轉錄速率來增強,這可以通過降低誘導劑的濃度來實現。選擇的媒介:最重組蛋白生產通過分批培養來培養細胞。從一開始就將所有必需的營養物質加入到生長培養基中是至關重要的。

優化蛋白質的純化

固定化金屬親和色譜(IMAC)應該用作純化過程的第一階段,

當需要進一步純化時,使用凝膠過濾或尺寸排阻色譜法。必要時,離子交換色譜應該作為“純化"的最后一步

有可能刪除親和標簽以實現額外的純化并減少重組蛋白中存在的非原始序列的數量。