為大腸桿菌開(kāi)發(fā)最佳表達(dá)系統(tǒng)
根據(jù)科學(xué)界目前的信息，建議開(kāi)發(fā)一種適合大腸桿菌的表達(dá)系統(tǒng)是安全的。它應(yīng)由促進(jìn)有效轉(zhuǎn)錄、穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄物、使翻譯穩(wěn)定、產(chǎn)生真正的重組蛋白而不被截短或延伸的變體污染、保持溶解性并聚集到總細(xì)胞蛋白的約20%的DNA成分組成。這種類型的表達(dá)整合了管家啟動(dòng)子s70所確認(rèn)的共有啟動(dòng)子，并且它可以通過(guò)整合UP元件而經(jīng)歷額外的改善。誘導(dǎo)相鄰基因的通讀轉(zhuǎn)錄受到兩個(gè)缺乏任何因子的強(qiáng)轉(zhuǎn)錄終止子的串聯(lián)排列的阻礙。在轉(zhuǎn)錄物兩端發(fā)現(xiàn)的反向重復(fù)穩(wěn)定了轉(zhuǎn)錄物本身。這些重復(fù)序列可以產(chǎn)生莖環(huán)結(jié)構(gòu)，阻礙5'端的核酸內(nèi)切酶活性和3'端的核酸外切酶破壞，但它們不抑制翻譯。最后，彈性Shine-Dalgamo序列、下游8bp的AUG起始密碼子和延長(zhǎng)的UAAU終止密碼子確保了有效的翻譯。折魯分子伴侶隨看新的多肽鏈同時(shí)表達(dá)，幫助它們折。然而，有必要指出這樣一個(gè)結(jié)論，即所有的重組蛋白都沒(méi)有一種“美生產(chǎn)方法。每種蛋白質(zhì)都有其挑戰(zhàn)。為了實(shí)現(xiàn)高度的合成，有必要通過(guò)系統(tǒng)地調(diào)整各種參數(shù)來(lái)優(yōu)化每種情況下的工藝。
