常用的細胞凋亡檢測方法匯總
細胞凋亡檢測對探究相關(guān)機制意義重大，本文主要介紹DNA片段化、線粒體及溶酶體檢測三個方面。細胞凋亡時，染色質(zhì)DNA會規(guī)律性斷裂，形成180-200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段。通過瓊脂糖凝膠電泳能觀察到 “梯狀” 條帶，TUNEL法可標(biāo)記斷裂DNA末端，實現(xiàn)高靈敏度檢測及細胞定位。線粒體在凋亡調(diào)控中作用關(guān)鍵，凋亡時膜電位改變，使用JC-1等熒光探針，依據(jù)熒光強度變化可知線粒體功能狀態(tài)。溶酶體檢測可利用溶酶體熒光探針，其熒光特性會隨溶酶體膜通透性改變而變化；檢測溶酶體相關(guān)酶如組織蛋白酶的活性，同樣能反映細胞凋亡情況。這些方法從不同層面助力細胞凋亡研究。
01DNA片段化
02線粒體檢測
在細胞凋亡過程中，線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔MPTP過度開放，線粒體跨膜電位降低，還會導(dǎo)致一些相關(guān)的促凋亡因子，如cytochrome c、AIF、Bcl-2家族以及pro-caspase等從線粒體釋放到胞質(zhì)中；同時線粒體內(nèi)的Bcl-2家族對細胞凋亡具有雙向調(diào)節(jié)作用。線粒體膜通透性發(fā)生改變時，其跨膜電位降低，細胞進入不可逆的凋亡過程。線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標(biāo)志性事件。
03溶酶體檢測
在特定條件下，包括活性氧、鞘氨醇、細胞凋亡效應(yīng)因子Bax等在內(nèi)的多種刺激因子均可誘發(fā)溶酶體膜通透性的改變，之后溶酶體內(nèi)含的蛋白酶(如組織蛋白酶等)及其他水解酶從溶酶體釋放至胞漿中，通過剪切效應(yīng)分子，激活包括凋亡酶在內(nèi)的其他水解酶而啟動細胞凋亡程序的執(zhí)行。
