水產品中甲醛的測定（三）
4.2高效液相色譜法
4.2.1原理
甲醛在酸性條件下與2,4-二硝基苯肼在60°C水浴衍生化生成2,4-二硝基苯腙，經二氯甲烷反復分離提取后，經無水硫酸鈉脫水，水浴蒸干，甲醇溶解殘渣。ODS-C18柱分離，紫外檢測器338 nm檢測，以保留 時間定性，根據峰面積定量,測定甲醛含量，甲醛溶液高效液相色譜圖見附錄B
4.2.2儀器
4.2.2.1高效液相色譜，附紫外檢測器。
4.2.2.2高速離心機。
4.2,2.3 10 mmX150 mm具塞玻璃層析柱。
4.2.2.4恒溫水浴鍋。
4.2.2.5渦旋混合器。
4.2.2.6移液器：1mL；微量進樣器：20 μL；5 mL具塞比色管。
4.2.2.7 0. 22 μm 濾膜。
4.2.3試劑
4.2.3.1甲醇:色譜純，經過濾、脫氣后使用。
4.2.3.2二氯甲烷。
4.2.3.3 2,4--硝基苯腓溶液：稱取100 mg 2,4--硝基苯腓溶解于24 mL濃鹽酸中，加水定容至 100 mLo
4.2.3.4甲醛標準儲備溶液:配制及標定見本標準4. 1. 3. 8條,臨用時稀釋至20 μg/mL。
4.2.3.5無水硫酸鈉:經550°C高溫灼燒,干燥器中儲存冷卻后使用。
4.2.4測定步驟
4.2.4.1樣品處理
取4.1.4制備水蒸氣蒸餾液0. 1 mL?1. 0 mL,置于5 mL具塞比色管中，補充蒸餾水至1. 0 mL,加入 0. 2 mL 2,4-二硝基苯腓溶液，置60°C水浴15 min,然后在流水中快速冷卻，加入2 mL二氯甲烷,渦旋混合器振蕩萃取1 min,3 000 r/min,離心2 min,取上清液再用1 mL二氯甲烷萃取2次，合并3次萃取的下 層黃色溶液，將萃取液經無水硫酸鈉柱脫水,60°C水浴蒸干，放冷，取1.0 mL色譜純甲醇溶解殘渣，經孔 徑0. 22 μm濾膜過濾后做液相色譜分析用。
4.2.4.2色譜條件
4.2.4.2.1 色譜柱:ODS-C18柱,5μm,4. 6 nm × 250 nm。
4.2.4.2.2色譜柱溫度：40°C。
4.2.4.2.3 流動相：甲醇+水(60+40) ,0. 5 mL/min。
4.2.4.2.4 檢測器波長:338 nm。
4.2.4.3標準曲線的繪制
分別取20μg/mL的甲醛應用液0 mL、0.1 mL、0.25 mL、0.5 mL、0.75 mL、L 0 mL(相當于0μg、 2μg、5μg、10 μg、15 μg、20μg)于5 mL具塞比色管中，加蒸餾水至1. 0 mL,按4. 2. 4. 1處理后取20μL進樣。根據岀現時間定性(5.1 min),峰面積定量，每個濃度做2次，取平均值，用峰面積與甲醛含量作圖，繪制標準曲線。取樣品處理液20 μL注入液相色譜測得積分面積后從標準曲線查出相應的濃度。
4.2.5結果計算
樣品中甲醛的含量按式(3)計算,計算結果保留2位小數。
式中：
X3——水產品中甲醛含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；
C3 —曲線結果，單位為微克每毫升(μg /mL)；
M3——樣品質量，單位為克(g);
V3——樣品測定取蒸餾液的體積，單位為毫升(mL)；
200——蒸餾液總體積，單位為毫升(mL)。
4. 2. 6回收率
樣品蒸餾液中添加甲醛標準溶液計算得到的回收率＞90 %。
4.2.7精密度
在重復性條件下獲得2次獨立測定結果：
當樣品中甲醛含量≤5 mg/kg時，相對偏差≤1O % ； 當樣品中甲醛含量＞5 mg/kg時，相對偏差≤5 %。
4.2.8檢出限
樣品中甲醛的檢出限為0. 20 mg/kg。
文章來源：《水產品獸藥殘留限量及監測方法查詢手冊》
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