正常大兔主動脈內皮細胞的培養

實驗材料：

1.  正常大兔主動脈；

2.  不含Ca²⁺ 和Mg²⁺ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；

3.  培養用液：M199培養液（含20%小牛血清）；0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA（1:1，V：V）混合消化液；D-Hanks液、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；

4.  培養器具：培養瓶或皿、白內障、眼科剪、鑷子等；

培養方法：

1．  將動物主動脈取出后，用絲線結扎血管一端，然后用探針頂住該端，將整條血管翻轉，使內膜翻在外面。將另一端翻折入腔內0.5cm并用絲線扎緊，以防外膜外露及避免酶液進入外膜腔內；

2．  用D-Hanks液清洗干凈外翻的內膜面，將血管浸泡在含0.1%膠原酶溶液的小瓶內。蓋上瓶蓋，在37℃水浴中輕輕搖蕩消化，使內皮細胞離散下來。消化15—20min后，見酶液稍有渾濁，即加入等量的含20%小牛血清的M199培養液，以終止酶的作用。離心（1500r/min,5min）后，棄上清液，用20%小牛血清M199培養液重新懸浮細胞；

3．  接種到培養器皿內，入37℃、含5%CO₂ 培養箱中培養。待細胞長滿瓶皿的生長表面即可傳代；

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