正常大兔主動脈平滑肌細胞培養

實驗材料：

1. 正常大兔主動脈

2. 不含Ca²⁺ 和Mg²⁺ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2

3. 消化液：0.125%胰蛋白酶，0.1%膠原酶Ⅰ

4. 細胞培養瓶（T25）

5. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

6. 網篩（100目）

7. 離心管（15ml、50ml）

實驗方法：

1. 處死大兔，分離出主動脈，放入預冷的含雙抗的1×PBS（pH=7.2）反復清洗3次。以洗去表面血絲和粘膜；

2. 將清洗過的大動脈剪成2.5 ~ 3cm的血管段，剝離外膜；

3. 將去外膜的血管段放入培養皿中，縱向剪開管壁，然后使內膜朝上，用小刀片輕輕刮去內膜細胞。加1×PBS洗滌中膜3次，將中膜剪成1mm³的組織塊；

4. 將組織塊移入50ml離心管中，加入適量0.1%膠原酶Ⅰ溶液，在37℃恒溫箱中消化1 ~ 3h，至組織塊成絮狀為止；

5. 1000r/min，離心5min，去上清。再加入0.125%胰蛋白酶溶液，37℃水浴中攪拌消化5 ~ 10min。用含血清的培養基終止消化，吸管輕輕吹打2-3min，以得到分散的平滑肌細胞；

6. 過100目網篩，收集濾液，1000r/min離心5min，棄上清；

7. 加培養液重懸細胞、調整細胞濃度至1×10⁵ 個/ml，接種于培養瓶中，置于37℃、5%CO₂ 的培養箱中培養；

8. 兩天后第一次換液，之后每天換液一次。

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