細(xì)胞生長(zhǎng)的ATP檢測(cè)[熒光素酶法]

1． ATP 反應(yīng)液（ Bio-Orbit ）是粉末狀混合物，含有熒光素、熒光素酶、 0.5mmol 醋酸鎂、 50mg BSA 和 0.1 μ mol 無(wú)機(jī)焦磷酸。在 4 ℃可以保存 1 個(gè)月。用前用 10ml 含 2mmol/L EDTA 的 0.1mol/L pH7.75 Tris- 醋酸緩沖液稀釋。稀釋液分裝后可在－ 20 ℃長(zhǎng)期保存。

2． 在已經(jīng)完成促增殖或抑生長(zhǎng)試驗(yàn)后的 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中（每孔含 100 μ l 細(xì)胞培養(yǎng)液），每孔加 0.1ml ATP 釋放因子，室溫中反應(yīng) 5 分鐘。取另一塊 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，從第一塊板的各孔中吸 0.1ml 細(xì)胞溶解物到第二塊板的相應(yīng)各孔。

3． 在低于 25 ℃中，將第二塊板置自動(dòng)多孔熒光檢測(cè)儀中。用自動(dòng)加樣器，每孔加入 20 μ l ATP 反應(yīng)液，立即檢測(cè) 10 秒鐘的熒光強(qiáng)度。溫度升高，檢測(cè)敏感性就下降。

4． 用 RLU （ Y 軸）對(duì)細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋度（ X 軸）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定待測(cè)樣品中細(xì)胞因子的含量。