細(xì)胞生長(zhǎng)的ATP檢測(cè)

1．ATP反應(yīng)液（Bio-Orbit）是粉末狀混合物，含有熒光素、熒光素酶、0.5mmol醋酸鎂、50mg BSA 和0.1μmol無(wú)機(jī)焦磷酸。在4℃可以保存1個(gè)月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸緩沖液稀釋。稀釋液分裝后可在－20℃長(zhǎng)期保存。

2．在已經(jīng)完成促增殖或抑生長(zhǎng)試驗(yàn)后的96孔細(xì)胞培養(yǎng) 板中（每孔含100μl細(xì)胞培養(yǎng)液），每孔加0.1ml ATP釋放因子，室溫中反應(yīng)5分鐘。取另一塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，從第一塊板的各孔中吸0.1ml細(xì)胞溶解物到第二塊板的相應(yīng)各孔。

3．在低于25℃中，將第二塊板置自動(dòng)多孔熒光檢測(cè)儀中。用自動(dòng)加樣器，每孔加入20μl ATP反應(yīng)液，立即檢測(cè)10秒鐘的熒光強(qiáng)度。溫度升高，檢測(cè)敏感性就下降。
4．用RLU（Y軸）對(duì)細(xì)胞因子 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋度（X軸）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定待測(cè)樣品中細(xì)胞因子的含量。