地高辛檢測方法

技術原理：  

    地高辛標記技術源于一種從洋地黃類植物（毛地黃和毛花毛地黃）中提取的類固醇（Steroid ）物質―― Digoxigenin （DIG ），在醫學上可用于治療各種急性和慢性心功能不全以及室上性心動過速、心房顫動和撲動等疾病。由于洋地黃植物的花和葉片Digoxigenin 在自然界中的唯一來源，因此抗DIG 的抗體不會與其他的生物物質結合，從而可以滿足特異性標記的需要。這一點，正是DIG 勝于生物素(Biotin) 的地方――同樣是小分子標記物，生物素廣泛存在于各種組織中，對于靈敏度很高的標記檢測實驗來說，樣品自身含有的內源生物素，就會對結果產生干擾。地高辛就能夠很好地避免這個問題。

技術特點：

與放射性標記和檢測技術相比較，DIG 系統具有一下多個優勢：

è高靈敏度，完全可滿足實驗需要，某些方面甚至可與放射性標記的靈敏度向媲美

è曝光時間短，結果顯示時間以分鐘計算，無需幾小時甚至幾天的自顯影過程

è安全環保，不接觸放射性物質，不會對環境造成污染

è探針可重復使用，最少可以穩定儲存一年

è可輕松進行探針撥離和重探

è憑借多年的經驗和眾多使用者的反饋意見，提供全面的應用指南

應用領域：

地高辛系統能夠安全高效地標記DNA, RNA 或是寡聚核苷酸探針，這些探針可以被廣泛地應用在

èSouthern blotting, dot blotting

èNorthern blotting

èArray

èColony hybridization

èIn situ hybridization

èELISA

技術細節：

    DIG 通過一個含有11 個碳原子的空間臂與尿嘧啶核苷酸上的C5 位置相連，一定濃度的DIG 標記的核苷酸可以通過DNA polymerase( 如E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase ）、RNA polymerase ( 如SP6, T3 或T7 RNA Polymerase) 或是末端轉移酶（Terminal Transferase ）的作用摻入到核苷酸探針中；也可通過隨即引物標記（random primed labeling ）, 缺口平移（nick translation ），PCR ，3 ’ 端標記/ 加尾或是體外轉錄制備帶有DIG 標記的探針。當然也可以通過化學合成的方法進行核苷酸的標記。 

Fig. Structure of Alkali-liable Digoxigenin(DIG)-dUTP

    對于DIG 標記探針的雜交檢測，可選用連接有堿性磷酸酶（alkaline phosphatase ），過氧化物酶(peroxidase), 熒光素（fluorescein ）, 若丹明（rhodamine ）或是膠體金（colloidal gold ）高親和性的抗DIG 抗體共軛物；也可選用不帶任何共軛連接的抗DIG 抗體和二級抗體。

    檢測的靈敏度主要依賴于對不同抗DIG 抗體共軛物顯示方法的選擇。以連接有堿性磷酸酶的抗DIG 抗體為例：即可以使用NBT 或BCIP 做底物的顯色法，也可以使用HNPP 熒光堿性磷酸酶底物，檢測的靈敏度常規可達到0.1pg (Souther blot) 。