蒽酮法測定可溶性糖
一、原理
糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量測定。
該法的特點(diǎn)是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖與己糖，而且可以測所有寡糖類和多糖，共中包括淀粉、纖維素等（因?yàn)榉磻?yīng)液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)），所以用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實(shí)際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量，在沒有必要細(xì)致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應(yīng)用價(jià)值。
但在測定水溶性碳水化合物時(shí)，因與蒽酮試劑發(fā)生反應(yīng)而增加了測定誤差。
此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺，故測定糖的混合物時(shí)，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時(shí)，則可避免此種誤差。
糖類與蒽酮反應(yīng)生成的有色物質(zhì)在可見光區(qū)的吸收峰為630nM，故在此波長下進(jìn)行比色。
二、儀器與用具
電子天平；容量瓶：100ml 4個(gè)，50ml 2個(gè)；漏斗；小試管若干支；電爐；刻度吸管0.5ml1支，2.0ml 3支，5ml 4支；分光光度計(jì)；記號筆。
三、試劑
蒽酮乙酸乙酯試劑：取分析純蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，貯于棕色瓶中，在黑暗中可保存數(shù)周，如有結(jié)晶析出，可微熱溶解；濃硫酸（相對密度1.84）。
四、方法
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作按方法一標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法加入標(biāo)準(zhǔn)的蔗糖溶液，然后按順序向試管中加入0.5Ml蒽酮乙酸乙酯試劑和5Ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管準(zhǔn)確保溫1Min，取出后自然冷卻至室溫，以空白作對照，在630nM波長下測其光密度，以光密度為縱坐標(biāo)，以糖含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程。
2.可溶性糖的提取取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取0.10～0.30g，共3份，分別放入3支刻度試管中，加入5～10ml蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液過濾入25ml容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘?jiān)?，定容至刻度?/span>
3. 顯色測定吸取樣品提取液0.5ml于20ml刻度試管中（重復(fù)2次），加蒸餾水1.5ml，以下步驟與標(biāo)準(zhǔn)曲線測定相同，測定樣品的光密度。
4. 計(jì)算可溶性糖的含量，由標(biāo)準(zhǔn)線性方程求出糖的量，按式（1－1）計(jì)算測試樣品中糖含量。
可溶性糖含量(％)＝(C×V / A×n) / (W×106) (1－1)
式中C:標(biāo)準(zhǔn)方程求得糖量(μg)；A:吸取樣品液體積(Ml)；
V：提取液量(ml)；n：稀釋倍數(shù)；
W：組織重量(g)。
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