甲醛洋菜膠體電泳

甲醛洋菜膠體電泳 （formaldehyde-agarose gel electrophoresis）甲醛是一種常用的RNA 變性劑。在進行甲醛洋菜膠體電泳分析時，必須先配制含有甲醛的洋菜膠體，RNA 也必須先以甲醛及formamide 進行變性處理，以確保其二度結構充分被打開。

由于甲醛可能是一種致癌物質，配制膠體及進行電泳分析時都應在抽氣櫥里小心操作；進行電泳時所使用的緩沖液為MOPS （3-[N-morpholino] propanesulfonic acid）。此外，含有甲醛的洋菜膠體比較滑溜，容易破裂，在移動膠體時應特別留神。

由于rRNA 占細胞RNA總量的80~85%,以ethidium bromide 染色后，呈現于膠體上的兩個主要RNA色帶應該分別是large 與small rRNAs （真核生物為28S 與18S,原核生物為23S 與16S）；散布于small rRNA 附近，呈淡淡smear 的就是mRNAs,這是因為mRNAs 存在量不多，而且長度不一的緣故。長度較短的5S rRNA 及tRNA 等則在膠體下方也以特定色帶呈現。

儀器用具：

65℃恒溫水槽；微量離心機；Mupid II 迷你電泳槽及鑄膠器；UV transilluminator;防護面罩；拍立得相機；抽氣櫥

藥品試劑：

自菌體抽取的RNA （I-1, I-2, U-1, and U-2） 與胞外轉錄反應所制備的正意股及反意股RNA （#1, #2, #3, and #4）。

5×formaldehyde gel running buffer （0.1 M MOPS, pH 7.0; 40 mM sodium acetate; 5 mM EDTA）

Formaldehyde gel loading buffer （0.25% bromophenol blue; 0.25% xylene cyanol;50% glycerol; 1 mM EDTA）

Ethidium bromide （1 μg/μL in dH2O/DEPC）

dH2O/DEPC

方法步驟：

◆ 注意：

a. 下列實驗主要參照Sambrook and Russell （2001） 的方法。

b. 進行下列實驗時請務必戴手套。

c. 甲醛與formamide 都放在抽氣櫥內。