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脂肪酶活性測定方法
發布日期:2022-09-23 10:31:38


脂肪酶活性測定方法


具體步驟如下:

取100 ml,三角瓶4個,每瓶加人5 mL磷酸緩沖液(pH= 7.5 , 0.02 5mol/1)和4m l,聚乙烯醇橄欖油乳化液,置于37 C水浴中保溫5 min,然后在兩個瓶中各加人1 MI.酶液。


從加人酶液開始精確計算時間,繼續保溫10 min,取出后立即加入95%乙醇5 ml,,以停止酶作用,再加酚酞指示劑3滴,用0.0 5m ol/I,的氫氧化鈉滴定至溶液呈粉紅色為止,另外兩個錐形瓶不加酶液,也繼續保溫15 min后,立即取出,各加人15 MI 95%乙醇作為對照。


取平均值計算酶的活性或相對活性..酶活力定義為在37 C pH=7.5條件下,每分鐘催化生成1 pmol脂肪酸所需的酶量為一個活力單位(U)。


還需要確定具體脂肪酶的性質,是酸性還是堿性,最適作用pH 以及溫度,通過實驗來確定,從而調整測定時磷酸緩沖液pH值,溫度等具體條件。



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