細胞固定、染色原理與方法
一、固定與固定液
固定：將新鮮的活組織從生物體取下后，立即投入固定劑中，借助化學藥品的作用，使細胞保持原有形態(tài)、結構的一種手段。
1. 目的
（1）迅速防止細胞死亡后的變化,防止自溶、腐敗，盡量保持生長狀態(tài)結構。
（2）使細胞中的蛋白質、脂肪、糖、酶等成分轉變?yōu)椴蝗苄晕镔|，以保持生前的形態(tài)。
（3）使組織內各種物質成分產生不同的折光率，便于觀察和鑒定。
（4）使不同組織成分對染料有不同的親和力，便于染色。
（5）防止細胞過度收縮或膨脹，失去原有的形態(tài)結構。
2. 時期
（1）有絲分裂：有絲分裂主要發(fā)生在根尖、莖生長點及幼葉等部位的分生組織，根尖取材容易，操作和鑒定方便。
（2）減數(shù)分裂：選取適當大小的花蕾是觀察花粉母細胞減數(shù)分裂的關鍵性的第一步。此時的植株形態(tài)及花蕾大小依植物的類別及品種有所不同。
小麥：在植株開始挑旗，旗葉與下一葉的葉耳間距為3-4 cm，花藥長度大致在1-2 mm左右，黃綠色時取材最好。如花藥為綠色時則為時過早，花藥為黃色，則已過時。一般上午8-10點為取材最佳時間。
玉米：一般夏玉米在7月份取材，以上午7-8點為好。在玉米雌穗未抽出前的7-10天手摸植株上部(喇叭口下部)有松軟感覺，表明雄花序即將抽出。用刀在頂葉近喇叭口處縱向劃一刀，切口長10-15 cm，剝出雄花序，頂端花藥長3-5 mm，花藥尚未變黃時取材。
蠶豆：從現(xiàn)蕾開始，上午10-11點可選取2-3 mm大小的花蕾或一小段花序。蠶豆開花的次序是由下而上，由外而內。
3. 固定時的注意事項
（1）固定液量：20倍于材料的體積，以免固定液被稀釋。
（2）選擇合適的固定液：滲透力強的固定液既可以迅速進入組織中，又不使組織過度收縮或膨脹。
（3）固定的時間要合適：
與材料的大小和溫度有關：材料大則時間長，材料小則時間短；溫度高則時間短，溫度低則時間長。
經固定的材料如不及時使用，可以經過90%酒精換到70%酒精中各半小時，再換入一次70%酒精，在0-4 ℃冰箱內可保存半年。經過較長時間保存的材料進行觀察前可以換新的固定液再處理一次，效果較好。
固定液：固定液包括簡單固定液和混合固定液兩種。簡單固定液就是用一種藥品作為固定液，如乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞等。簡單固定液只對細胞的某種成分固定效果較好，而不能將所有的成分都保存下來。混合固定液是指兩種或兩種以上的化學物質的混合液，如卡諾氏固定液等。
1. 固定液的條件
（1）迅速滲入組織,殺死原生質。在殺死的短時期中,細胞形態(tài)不致有所變化。
（2）必須具有滲透力，對組織各部分的滲透力相等，可使組織內外完全固定。
（3）盡可能避免使組織膨脹或收縮。
（4）使細胞內的成分凝固或沉淀。
（5）增加細胞內含物的折光程度，易于鑒別。
（6）增加媒染作用和染色能力。
（7）使組織變硬，具有一定的硬度。
（8）固定以后能起到保存的作用。
（9）在凝固原生質以后，增加細胞對于各種穿透的抵抗力，不致于因以后的處理而使固定的原生質變形。
2. 常用的幾種固定液
（1）酒精：有固定、硬化和脫水的作用。可以固定白蛋白、球蛋白、核蛋白，但對核蛋白固定效果較差(親和力小且易自溶)。酒精固定的特點是殺死快，滲透力強，對組織收縮較大(可收縮20%左右)，可使材料變硬。酒精常用于混合固定液中，但由于它本身是一種還原劑，很容易氧化成乙醛，甚至氧化成醋酸，因此最好不與三氧化鉻、重鉻酸鉀及鋨酸等氧化劑配合使用。但與甲醛、醋酸或丙酸配合，用作固定效果很好。酒精能溶解脂肪及凝脂，故不宜用來固定脂類材料。
（2）甲醛水溶液：甲醛在水中的溶解度為37-40%，滲透力強，固定均勻，對組織收縮作用小，一般用于固定大材料。市售溶液中含量下降，因形成三聚甲醛而失效。
（3）冰醋酸：純醋酸在溫度稍變低時即形成冰晶，所以又稱為冰醋酸。常用0.3-0.5%的濃度作為固定液。冰醋酸對材料有膨脹作用，對核蛋白固定好，可與水、酒精、氯仿混合。
（4）AF液：90 ml乙醇+10 ml甲醛 用于固定大塊組織。
（5）卡諾氏固定液： 冰醋酸:氯仿:無水乙醇=1:3:6
改良卡諾氏固定液: 冰醋酸:無水乙醇=1:3
二、染色與染色原理
根據(jù)染料的來源不同可分為天然染料(蘇木精、洋紅等)和人工合成染料（煤焦油染料，如堿性品紅等）。
1. 苯與苯的取代物
苯醌(紅色) 苯酚 三硝基苯
2. 染料的分子結構
呈酸或堿性，溶于水，可電離，可與材料結合.
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