結(jié)晶紫染色測(cè)定細(xì)胞數(shù)
1． 在 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板各孔中加 0.1ml 含 5 × 104 ～ 10 × 4 WEHI-164 細(xì)胞的培養(yǎng)液（含 10 ％小牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)液）， 37 ℃ 5 ％ CO2 的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 2 ～ 3 小時(shí)，讓細(xì)胞帖壁。
2． 用 RPMI-1640 培養(yǎng)液 10 倍遞次稀釋 TNF 標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)需要 3 ～ 5 倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加 0.1ml 稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品或待檢樣品，每個(gè)稀釋度 3 個(gè)重復(fù)孔。對(duì)照孔 6 個(gè)， 3 個(gè)陽性對(duì)照孔各加 0.1ml 含 4 μ g TNF 的 RPMI-1640 培養(yǎng)液， 3 個(gè)陰性對(duì)照孔各加 100 μ l RPMI-1640 培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng) 18 ～ 24 小時(shí)。
3． 甩去培養(yǎng)液，用 PBS 小心洗滌一次，每孔加 0.1ml 10 ％甲醇溶液固定細(xì)胞 30 秒鐘。
4． 吸去甲醇溶液，每孔加 0.1ml 結(jié)晶紫染液，室溫中放置 20 分鐘。
5． 輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養(yǎng)板倒置于吸水紙上吸干水分。自然干燥或 37 ℃烘干。此板可以在室溫中長期保存。
6． 測(cè)定前，每孔加 0.1ml 33 ％醋酸脫色，充分振蕩后在 570nm 處測(cè)定光吸收度。用光吸收度（ OD ）值對(duì)樣品稀釋度作圖，比較標(biāo)準(zhǔn)品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測(cè)樣品中的細(xì)胞因子活性
北京天優(yōu)福康生物科技有限公司
官網(wǎng)：http://m.dhfpump.com/
服務(wù)熱線：400-860-6160
聯(lián)系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
