熱酚法抽提酵母總RNA的方法

1. 將酵母細胞培養在3ml選擇性培養基中，30℃過夜旋轉培養。

2. 稀釋過夜培養的菌液，重新在10ml培養基中培養細胞。

3. OD600達到1.0時，收菌，4000rpm/min離心5min,棄培養基。

4. 將細胞懸浮于400μlAE緩沖液（50mMSodiumAcetate,10mMEDTA調整pH值至5.2）。

5. 加入1/10體積的10%SDS，充分混合。

6. 加入等體積在65℃預熱的酸性酚（pH4.5），混合。

7. 65℃加熱5min，冰上放置10min。

8. 在室溫下8000rpm/min離心10min。

9. 取水相,加入等體積的酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1），10000rpm/min離心8min。

10. 取水相，加入等體積氯仿/異戊醇（49∶1）10000rpm/min離心8min。

11. 加入1/10體積3MpH5.2的醋酸鈉，2.5倍體積的純乙醇，-20℃過夜沉淀。

12. 沉淀樣品于4℃離心5min，去除液體。

13. 在冰上干燥RNA（放置15min），最后用適量DEPC水溶解RNA。