用于真核生物宿主的載體

  真核細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控要比原核細(xì)胞基因復(fù)雜得多，用于真核細(xì)胞的克隆和表達(dá)載體也不同于原核細(xì)胞。目前所用的真核載體大多是所謂的穿梭載體（shuttle vector），這種載體既能在原核細(xì)胞中復(fù)制擴增，也可以在相應(yīng)的真核細(xì)胞中擴增及表達(dá)。由于在原核體系中易于進(jìn)行基因的復(fù)制、擴增、測序等，因此可以利用穿梭載體先將要表達(dá)的基因裝配好并大量復(fù)制后再轉(zhuǎn)移到真核細(xì)胞中去表達(dá)，這為真核細(xì)胞基因工程操作提供了很大的方便。

  用于真核生物基因表達(dá)的載體應(yīng)具備如下條件：

  ① 含有原核基因的復(fù)制起始序列以及篩選標(biāo)記，以便于在E.coli細(xì)胞中進(jìn)行擴增和篩選；

  ② 含有真核基因的復(fù)制起始序列以及真核細(xì)胞篩選標(biāo)記；

  ③ 含有有效的啟動子序列，保證其下游的外源基因能啟動有效的轉(zhuǎn)錄；

  ④ 應(yīng)包含 RNA聚合酶Ⅱ所需的轉(zhuǎn)錄終止序列和poly(A)加入的信號序列；

  ⑤ 具有合適的供外源基因插入的限制性內(nèi)切酶位點。