巨噬細(xì)胞培養(yǎng)

巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。巨噬細(xì)胞容易獲得，便于培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群，在條件適宜下可生活 2 － 3 周，多用做原代培養(yǎng)，難以長期生存。 我愛生物 5ibio

巨噬細(xì)胞也建有無限細(xì)胞系，大多來自小鼠，如 P338D1 、 S774A.1 、 RAW309Cr.l 等，均獲惡性，培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能，易于傳代和瓶壁分離，但難以建株。

培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各樣方法和各種來源來獲取細(xì)胞，以小鼠腹腔取材法最為實(shí)用，其法如下：

1、實(shí)驗(yàn)前三天，向小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯 lml （勿注入腸內(nèi)！），以刺流產(chǎn)生大量的巨噬細(xì)胞。 生物實(shí)驗(yàn)網(wǎng)

2、引頸處死小鼠。

3、手提鼠尾將其全浸入 70% 乙醇中 3 － 5 秒。 做最大最全的生物試驗(yàn)方法網(wǎng)站

4、置動(dòng)物于解剖臺(tái)，用針頭固定四肢，持鑷撕開腹部皮膚，但勿傷及腹膜壁，把皮膚拉向上下兩側(cè)，暴露出腹膜壁。

5、用 70% 酒精擦洗腹膜壁，注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中，同時(shí)用手指從兩側(cè)壓揉腹膜壁，使液體在腹腔內(nèi)流動(dòng)。

6、用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側(cè)．使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi)。

7、小心拔出針頭，把液體注入離心管。 做最大最全的生物試驗(yàn)方法網(wǎng)站

8、4 ℃下 250g 離心 10 分鐘后，去上清，加 10ml Eagle 培養(yǎng)基。

9、計(jì)數(shù)細(xì)胞。每只鼠可產(chǎn)生 20 一 30 × 106 細(xì)胞，其中 90% 為巨噬細(xì)胞。

10、以 3 × 105 個(gè)貼附細(xì)胞 / 平方厘米接種。

11、接種數(shù)小時(shí)后，除去培養(yǎng)液，可去除其它白細(xì)胞，純化培養(yǎng)細(xì)胞，用 Eagle 液沖洗 1 一 2 次，再加新 Eagle 培養(yǎng)液置 CO2 溫箱中。

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