色譜柱的使用及維護

色譜柱的維護

1、使用預柱保護分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）。

2、流動相使用前必須經脫氣和過濾處理。

3、避免流動相組成及極性的劇烈變化。

4、大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2～7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍。

5、如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢柱子沖洗干凈，并保存乙腈中。

6、壓力升高是需要更換預柱或沖洗色譜柱的信號。

系統注意事項

1、開、關系統，流速應有緩沖（1ml/min→0.8ml/min→0.4ml/min→0ml/min），以免壓力突變致使柱頭填料塌陷。

2、流動相是緩沖液系統，不要直接切換到強溶劑，突然轉換到高濃度有機溶劑可能會使HPLC流動體系中的緩沖液沉淀，這樣會導致更大的問題如柱頭堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞損傷或進樣閥轉軸失靈。應該先用無緩沖流動相（即把緩沖液換成水），沖洗5～10個柱體積以后才更換強溶劑。

3、做完測試后切忌直接用100%有機溶劑沖洗柱子，須用90%水-10%有機溶劑（如流動相是緩沖液，應用純水或含5%有機溶劑-水溶液）沖洗至少30min后，用有機溶劑沖洗30min左右，最后將色譜柱保存在有機溶劑中。

4、更換色譜柱前，須對使用的色譜柱進行沖洗、平衡后，保存在有機溶劑中（最好是乙腈中）。

5、取下色譜柱時，應立即將兩端封口。

6、除特殊情況外，一般都應使用預保護柱。

平衡色譜柱的原因

反相色譜柱在經過出廠測試后是保存在乙腈/水中的，由于色譜柱在儲存或運輸過程中可能會干掉，如不進行平衡，樣品中含有的一些鹽、脂質、含脂物質、腐質酸、疏水蛋白質和其它一些生物物質很容易與HPLC柱發生相互作用的物質，使這些物質吸附在色譜柱上，使色譜柱污染。

如何平衡色譜柱？

因此在用流動相分析樣品之前，我們應先使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果我們所使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水“過渡”。平衡過程中，將流速緩慢地提高用流動相平衡色譜柱直到獲得穩定的基線（緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時間來平衡）。

色譜柱污染后可能出現的情況？

滯留在色譜柱中被吸附的樣品成分累積到一定程度足以使他們開始形成新的固定相，有時候這些分析物能與這些雜質作用形成一定的分離機理，這些非目標產物的干擾能被檢測器檢測到而且能形成色譜峰，氣泡，基線擾動及基線漂移等現象，在色譜圖上出現“怪峰”，表現為負峰、寬峰、饅頭峰、雙頭峰及前吐舌后拖尾峰和 保留時間會波動。這些行為通常只有通過平行實驗才能發現。

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