MTT方法的使用步驟

1：接種細胞：用含10％胎小牛血清得培養液配成單個細胞懸液，以每孔
1000－10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul.

2:培養細胞：同一般培養條件，培養3－5天（可根據試驗目的和要求決定培養時間）。

3：呈色：培養3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配)20ul.
繼續孵育4小時，終止培養，小心吸棄孔內培養上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。

4：比色：選擇490nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。

注意事項：
（1）選擇適當得細胞接種濃度。
（2）避免血清干擾：一般選小于10％的胎牛血清的培養液進行試驗。在呈色后盡量吸盡孔內殘余培養液。
（3）設空白對照：與試驗平行不加細胞只加培養液的空白對照。其他試驗步驟保持一致，最后比色以空白調零。