細菌與菌落的形態觀察
一、菌落形態觀察
實驗目的：
通過在固體培養基上培養微生物，觀察菌落的形態特征，以便初步鑒定菌種。
實驗步驟：
1. 從純化的平板（單個菌落）取樣或做稀釋涂布培養，按無菌操作。
2. 在合適溫度與時間培養（例如大腸桿菌37°C，12–24h；土壤菌可能需更久）。
3. 取出培養皿，先不打開蓋子，用放大鏡或肉眼觀察并記錄以下特征。
形狀：圓形、橢圓形、不規則、絲狀、根狀等。
邊緣：整齊、波狀、分枝狀、鋸齒狀。
表面：光滑、粗糙、皺褶、有光澤或無光澤。
隆起：平坦、凸起、傘狀、凹陷。
透明度：透明、半透明、不透明。
顏色：白、黃、紅、綠等。
氣味：特征性氣味。例如綠膿桿菌有甜腥味。僅作補充證據，操作時注意安全通風。
小技巧：觀察時可以將培養皿置于黑色背景上，有助于分辨菌落邊緣和顏色差異。
二、顯微鏡下的細菌形態觀察
實驗步驟：
01制作細菌涂片
①在載玻片上滴一小滴蒸餾水（固體樣品先與水混勻）。
②用接種環取少量菌體在水滴中涂勻至形成薄膜。
③晾干（自然或電熱片低溫），用甲醇或酒精短暫固定（30~60s）并晾干。
02染色
如革蘭染色、芽孢染色等。
03顯微鏡下觀察
觀察指標：
形態：球菌、桿菌、螺旋菌等。
排列：單個、成對（雙球菌）、鏈狀（鏈球菌）、簇狀（葡萄球菌）等。
大?。阂话?.5–5μm左右。
運動性：有無鞭毛（可用鞭毛染色或懸滴法觀察）
三、常見染色方法及目的
（一）革蘭染色（Gram stain）
用途：區分革蘭陽性（紫色）與革蘭陰性（紅色）
步驟：
1.結晶紫染色 1min → 水洗。
2.加碘液 1min → 水洗（碘是媒染劑）。
3.退色：酒精/丙酮短促沖脫（5–10s） → 立即水洗。
4. 復紅：沙黃或番紅染色 30–60s → 水洗，晾干，油鏡觀察。
（二） 芽孢染色
用途：觀察芽孢（耐熱、耐化學） 步驟：
用馬拉綠或孔雀綠在加熱條件下染芽孢，然后復紅染細胞。芽孢呈綠色、細胞呈紅色。
大腸桿菌，圓形、光滑、濕潤、灰白色，革蘭陰性桿菌（紅色）。
金黃色葡萄球菌，圓形、隆起、光亮、金黃色，革蘭陽性球菌（紫色）。
枯草芽孢桿菌，粗糙、不規則、干燥，陽性桿菌、有芽孢。
銅綠假單胞菌，擴散性強，綠色熒光，帶甜腥味，陰性桿菌。
鏈霉菌，干燥、粉末狀、土味明顯，陽性絲狀菌。
五、實驗注意事項
1. 嚴格無菌操作，防止混入其他菌。
2. 觀察前不要打開培養皿蓋子太久，以免污染或感染。
3. 使用油鏡觀察時，一定要加香柏油并在使用后及時擦干。
4. 不同菌落之間要做好標記與記錄（編號、日期、培養條件）。
5. 染色實驗中，洗脫酒精的時間控制非常關鍵，過長會導致脫色。
6. 多種不同菌落同時出現：說明接種或培養時污染或樣品本身含混合菌。
7. 顏色隨時間變化：色素產量與培養時間、培養基有關；記錄培養時間。
8. “假陽性/假陰性”染色：退色過久、過短或固定不當會導致假讀數；設對照。
9. 干擾物（瓊脂碎片、沉淀）：拍照和觀察時注意不要把雜質誤認為菌落特征。
總結：
菌落與形態觀察實驗能讓我們從“看菌落”到“看細胞”，再到“看特征結構”，這三層結合起來，是細菌初步鑒定的基礎。簡單來說就是“宏觀看菌落，微觀看細胞，染色辨結構?！?/span>
